用博迅YQX-75SII對快繁技術分析

1 材料與方法 

1.1 試驗時間、地點 

于2017年4月在山東省林業科學研究院組 培室進行。 

1.2 試驗材料 

采用山東省林業科學研究院自主培育的中國檉柳莖段為試材。 

1.3 試驗方法

將帶回的小枝剪成長 1.5~2 cm 莖 段，先用肥皂水洗凈表面灰塵和菌體，洗凈后，流水沖 洗0.5~1 h。將清洗后的莖段置于超凈工作臺上，用75% 酒精浸泡30 s，期間緩慢晃動，用無菌水沖洗3遍，再用 2%次氯酸鈉消毒液浸泡3~5 min，無菌水沖洗4~5次，倒 入0.1%含有吐溫的升汞溶液中輕晃(3、5、8、10 min)，無 菌水沖洗5次，取出莖段，用無菌濾紙吸去表面水分， 剪去接觸升汞的外植體斷面，接種在初代培養基上。 10天后統計外植體的滅菌及生長情況。初代培養使用MS培養基，加蔗糖20 g/L， 瓊脂 6.5 g/L，pH 5.8~6.0。培養條件為溫度(25±2)℃， 光照度2000~3000 lx，光照時間14 h。經過15~20天的 培養，觀察新梢生長情況。MS 為基本培養基，取初 代培養 30 天、苗高為 1.0~2.0 cm 的無菌苗，接種于添 加不同配比的 6-BA(0.5、1.0、1.5 mg/L)和 NAA(0.05、 0.1、0.2 mg/L)的培養基上。培養基均附加蔗糖30 g/L、 瓊脂7.0 g/L，pH 5.8。試驗每處理1瓶，每瓶接種6個 單芽，重復 3 次。置光下（培養溫度(25±2)℃，光強 2000~3000 lx，光照時間16 h/d）培養30天后觀察統計 苗芽增殖情況。生根率=(生根外植體數/接種外植體數)×100% … (3) 1.3.6 試驗儀器 雙人雙面垂直凈化工作臺（上海博迅 實業有限公司生產 ，外型尺寸 1460 mm ×700 mm × 1650 mm，工作區風速范圍 0.1~0.6 m/s（可調））；上海博迅YQX-100G全自動立式壓力蒸汽滅菌鍋（上海博迅實業有限公司生產， 100 L）。

2 結果與分析

將經升汞處理不同時間的外植體接種到初代培養 基上，10天后統計外植體的滅菌及生長情況如表1所 示。處理1污染率較高，說明升汞3 min浸泡滅菌不夠 徹底；當升汞浸泡時間延長至5 min，污染率顯著降低 至5.6%，外植體長勢較好。但隨著升汞浸泡時間的再 延長，外植體污染率呈升高態勢，部分外植體底部出現 褐化，加入活性炭能夠抑制褐化現象。當升汞浸泡時 間達到 10 min 時，部分外植體出現整株干枝情況。綜上，采取75%酒精浸泡30 s、2%次氯酸鈉浸 泡 3~5 min 和升汞浸泡 5 min 的滅菌方案為最適宜的 滅菌方案。

3 討論 

在檉柳的快繁體系建立過程中，通常采用種子、 莖段等作為外植體獲得無菌苗，后通過2種途徑（誘 導愈傷組織進而獲得叢生芽和直接誘導叢生芽）進 行擴繁。本試驗采用直接誘導叢生芽的方法進行擴繁，周期短，操作簡單，能快速獲得大量無菌苗。在誘 導叢生芽的過程中，對細胞分裂素 6-BA 和生長素 NAA 的配比是叢生芽生長健壯與否的關鍵，6-BA 有 促進細胞分裂、分化、抑制頂端優勢、促進側芽的作用； NAA主要是促進細胞的生長，特別是細胞的伸長。劉 振林在進行白花檉柳的叢生芽誘導過程中采用的生長 素為IBA，叢生芽的出芽率達98.68%。

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