纖維細胞增殖分析

1 材料與方法 

1.1 細胞株與藥物 

人胚胎皮膚成纖維細胞株（CCC-ESF-1，編號 ： BNCC339675）購自北京北納創聯生物技術研究院， 美洲大蠊提取物（乙醇提?。〦nto-A（黃褐色濃稠 膏狀）、Ento-B、Ento-C 和 Ento-D（褐色濃稠膏狀）、 Ento-E（ 黃 褐 色 凍 干 粉 末 ）、Ento-F（ 褐 色 液 體 ） 為云南省昆蟲生物醫藥研發重點實驗室自制。 

1.2 試劑與耗材 

H-DMEM 培養基（美國 Gibco 公司），碳酸氫鈉 （NaHCO3）、Hepes（北京索萊寶科技有限公司），胎 牛血清（美國 Gibco 公司），0.25% 胰蛋白酶（美國 Millipore 公司），噻唑藍（MTT）、二甲基亞砜（DMSO） （ 美 國 Sigma 公 司 ）， 雙 抗 青 鏈 霉 素 混 合 液（ 美 國 Millipore 公司），磷酸鹽緩沖液（PBS）（美國 Hyclone 公司）。 

1.3 儀器 

低速離心機（SC-2546）（安徽中科中佳科學儀 器有限公司），多功能酶標儀（Spectra Max M2）（美國 Molecular Devices 公司），立式壓力蒸汽滅菌器（YXQ-LS-50SII）（上海博迅實業有限公司醫療設備廠），電熱 恒溫水浴鍋（HWS-12 型）（上海一恒科技有限公司）， 水套式二氧化碳培養箱（美國 Thermo 公司），潔凈工 作臺（SW-CJ-1FD）（蘇凈集團蘇州安泰空氣技術有 限公司），冰箱（BCD-232MB/A）（廣東容聲電器股份 有限公司），立式超低溫保存箱（DW-86L386）（青島 海爾股份有限公司）。

2 結果

低倍光學電子顯微鏡下觀察可見，陰性對照組 CCC-ESF-1 細胞似長梭形或三角形，生長狀態良好。 30 μg/ml 美洲大蠊提取物 Ento-C 作用細胞 24 h 后，細 胞狀態較陰性對照組無變化。3 μg/ml 美洲大蠊提取物 Ento-B、Ento-E 和 300 μg/ml 美洲大蠊提取物 Ento-F 分別作用細胞 24 h 后，與陰性對照組比較，細胞數有少 量減少，細胞形態有皺縮，發生變形，三者細胞狀態相 似。10 μg/ml 美洲大蠊提取物 Ento-D 作用細胞 24 h 后， 細胞數有一定減少，細胞形態皺縮，間隙變大，棱角變 鈍，散布存在。3 μg/ml 美洲大蠊提取物 Ento-A 作用 細胞 24 h 后，細胞數變少明顯，細胞形態變短，細胞纖 維樣逐漸消失，甚至可以看到漂浮的細胞。

3 討論 

瘢痕形成和創面愈合機制是一個相當復雜的生物 學過程，其機制尚未完全清楚，一般認為增生性瘢痕的 成因來源于成纖維細胞的生物學特性異常，由于成纖 維細胞增殖、生長失控，膠原過度沉積導致真皮纖維 化。增生性瘢痕的治療方法有中藥療法、抗腫瘤藥治療、 手術治療、壓力治療、放射治療、激光治療、基因治 療等，目前尚無特效的治療方法。盡管增生性瘢痕屬 于良性病變，但由于影響體表美觀，關節部位的瘢 痕還可影響關節活動，降低生活質量，易復發，因此是 目前臨床上亟待解決的課題。

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