己酸菌的分離篩選分析（博迅MJX-250C使用）

1 材料與方法 

1.1 材料與試劑

老窖泥（1# 、2# 、3# ）：某老酒廠優質大曲酒發酵池乙醇醋酸鈉培養基：乙酸鈉0.5%，磷酸氫二鉀0.04%， 硫酸鎂0.02%，硫酸銨0.05%，酵母膏0.1%，調節pH至7.0，121 ℃高壓蒸氣滅菌20 min，接種前加入無水乙醇2%。

1.2 儀器與設備 

SW-CJ-ZFD雙人單面潔凈工作臺：蘇州蘇潔凈化設備 有限公司；MJX-250C立式恒溫培養箱：上海博迅實業有限公司醫療設備有限公司；LDZX-75KB立式壓力蒸汽滅菌 鍋：上海申安醫療器械廠；ALC-1104電子天平：賽多利斯科 學儀器有限公司；Agilent 6820氣相色譜（gas chromatography， GC）儀：美國安捷倫公司；DHG-9071A電熱恒溫干燥箱：上 海精宏實驗設備有限公司；722E可見分光光度計：上海光 譜儀器有限公司；LEICA電子顯微鏡：德國LEICA公司；DK98-II雙列八孔電熱恒溫水浴鍋：天津市泰斯特有限公司； C1000 Touch聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction， PCR）儀：美國伯樂公司。

2 結果與分析

隨著發酵溫度的升高，菌株A-3的己酸含量呈先升高后下降 的趨勢。當發酵溫度為37 ℃時，己酸含量最高，為8.17 g/L。 當發酵溫度低于11 ℃或高于57 ℃時，則幾乎不產己酸，故 最適發酵溫度為37 ℃，溫度耐受范圍為13～55 ℃。

3 結論 

通過對老窖泥的多次富集培養，從3# 老窖泥中篩選得 到3株高產己酸的菌株A-1、A-3和A-5，己酸產量分別為 5.73 g/L、9.77 g/L、7.45 g/L。通過形態觀察及分子生物學技 術鑒定3株菌株均為克魯維氏梭菌（Clostridium kluyveri）。 其中Clostridium kluyveri A-3己酸產量最高，對其發酵性能 進行測定。結果表明，Clostridium kluyveri A-3在22 h后進入 對數期，80 h后進入穩定期，其產己酸的最佳初始pH值為 7.0，發酵時間為14 d，發酵溫度為37 ℃，乙醇含量為2%，pH 耐受范圍為3.0～11.0，乙醇最高耐受含量為5%，溫度耐受 范圍為13～55 ℃。

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