甘露飲中多種成分相輔相成、協同作用是其藥理作用的重要基礎,而各種潛在活性成分的含量與臨床治療效果密切相關。綠原酸是茵陳的有效成分之一,具有清除體內自由基、抗氧化、抗菌、抗病毒和保肝利膽等作用。在國內外研究中分別關于綠原酸、麥角甾苷、柚皮苷、黃芩苷、甘草酸和熊果酸的含量提取及測定方法有相關報道,而甘露飲中多種代表性活性成分的提取及同時定量,國內外尚未見文獻報道。因此,本實驗上海博訊采用了正交試驗法,以6種有效成分綠原酸、麥角甾苷、柚皮苷、黃芩苷、甘草酸和熊果酸的含量為指標,對甘露飲的提取工藝進行研究,優選出最佳提取工藝,同時建立了HPLC法測定6種有效成分的含量,為完善甘露飲質量評價標準和臨床用藥提供依據。
1260 高效液相色譜儀(美國安捷倫科技有限公司);烘箱(上海博訊醫療生物儀器股份有限公司);XW-80A 型旋渦混合器(上海青浦瀘西儀器廠);旋轉蒸發儀(德國 IKA);CP225D 型電子天平(德國賽多利斯公司);粉碎機(吉首市中誠制藥機械廠)。
上海博迅BXH-65S精密可程式烘箱
方差分析結果表明提取時間對熊果酸、甘草酸、柚皮苷、綠原酸的提取含量影響顯著;黃芩苷的提取含量受料液比、提取時間、提取次數的影響當;提取時間、提取次數對麥角甾苷的提取含量影響不顯著。料液比、提取時間對甘草酸的提取含量有顯著影響:料液比1:8、提取時間為1h得到甘草酸含量最多,即序號4為最優;提取次數對綠原酸含量有顯著影響:提取次數為1次,綠原酸含量最多,即第3因素下1水平為最優方法。液料比、提取時間、提取次數對熊果酸、黃芩苷、柚皮苷、麥角甾苷提取含量影響并不顯著。綜合以上實驗結果,最佳提取工藝條件是:甘露飲提取溶劑為60%乙醇,料液比1:4、提取時間為1h、提取次數為1次。
試驗考察了甲醇、乙腈、緩沖鹽種類和濃度對樣品分離的影響,最后確認乙腈和0.1% 磷酸溶液進行梯度洗脫后,各色譜峰分離度好,保留時間適中,基線穩定,綠原酸、黃芩苷、甘草酸和熊果酸峰型和分離度均較好,而麥角甾苷與柚皮苷由于自身化學性質和方劑中含量差異的影響,能實現基線分離。經過方法學考察試驗,本文上海博訊建立的含量檢測方法準確、可靠,重復性好,可用于同時測定甘露飲中多種物質的含量,為甘露飲質量控制及綜合評價提供了借鑒。