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回顧 2017 年 4 月～ 2018 年 6 月在我院產 科門診選擇無創 DNA 進行產前篩查的孕婦共計 6903 例， 孕婦年齡為 17 ～ 44 歲，孕周為 12w 以上，近期未接受過 移植手術、異體輸血、干細胞治療，BMI 指≤ 28 的產前孕 婦進行分類指征統計，按照高齡妊娠（≥ 35 歲）、血清學 篩查高風險 / 臨界風險、NT 增厚、B 超軟指標異常 / 結構 異常、雙胎 /IVF-ET 妊娠、錯過其它篩查時機（≥ 22w）、 其它檢測（流產≥ 2 次和有不良妊娠或生育史）及自愿要 求檢測進行分指征統計，若同一位孕婦存在兩種或多種指 征，按上述順序只填寫最靠前的一次指標，同時統計二胎 例數。NIPT 產前篩查提示陽性結果的孕婦共 77 例，其中 13 例拒絕產前診斷直接引產，2 例流產，剩余 62 例均做同 意羊膜腔穿刺術進行產前診斷，對羊水進行培養及核型分 析，對微缺微重同時進行 CMA 檢測，最終確診為陽性例 數為 34 例，其中目標檢測疾病 T21/T18/T13 篩查陽性 31 例， 診斷陽性 20 例。并按時進行隨訪，記錄妊娠結局。
文庫構建試劑、測序芯片等均購 置于北京博奧生物公司。主要使用儀器 BioelectronSeq 4000高通量測序儀購置于北京博奧生物公司、實時定量 PCR 采 用 SYBR Green Realtime PCR Master Mix 在 ABI 7500 Realtime PCR Systems（Applied Biosystems）、博迅培養箱、 北昂核型分析軟件。
DNA 提取及文庫構建、文庫定量、按照公 式稀釋倍數 = 混合文庫濃度（nM）*1000/ 上機濃度（pM） 進行混合文庫 pooling 后上機測序。
測序儀進行高通量測序，基于 每個基因芯片中的反應孔會讀出一段短序列，成為 read， 根據染色體 N 上的 unique read 的總數 / 全部常染色體上 unique reads 總數，Z-score= 樣本 %chrN- 參考樣本的 %chrN 的平均值 / 參考樣的 %chrN 的標準差，按照質控標準和數 據分析軟件進行測序分析。
篩查陽性孕婦均在超聲引導下抽取 羊水 20ml，分別置于 2 個培養瓶中，每瓶 10ml。
對羊水細胞培養、收獲并制片、G 顯帶后進行核型分析，必要時加做 C 顯帶。
對需要做 CMA（SNParray）檢測的孕婦，我院進行轉診至上級醫院。
采用 SPSS 19.0 軟件進行統計學分析。 定性資料用率（%）表示，組間比較采用 χ2 檢驗。P ＜ 0.05 為差異有統計學意義。
我院共檢測無創產前 篩查檢測 6903 例，無創產前檢測中占比最多的 主要為自愿要求檢測組例數為 4651 例，占無創總檢測比例 的 67.38%，其次為高齡妊娠（≥ 35 歲）檢測例數 1366 例， 占無創總檢測比例的 19.78% ；血清學篩查高風險 / 臨界風 險檢測例數 495 例，占無創總檢測比例的 7.17% ；檢測占 比最少的兩項指征分別是 NT 增厚檢測例數 11 例，B 超軟 指標異常 / 結構異常檢測例 28 例，NT 增厚和 B 超異常共 計占比僅為無創總人數的 0.56% ；雙胎和 IVF-ET 妊娠檢 測例數 129 例，錯過其它篩查時機檢測例數 181 例，它們分別占無創檢測總數的 1.87% 和 2.60% ；其它檢測例數（自 然流產 2 次以上及不良妊娠史）42 例，占總檢測例數的 0.61%。各類指征中二孩（含以上）合計檢測例數為 3521 例占總檢測例數的 51%，其中高齡二孩 921 例占總檢測數 為 67.4%，自愿檢測 2243 例占比 48.2%，國家開放二孩政 策以來有效推動生育率的增加?？傮w陽性檢出率以高齡妊娠 （≥ 35 歲）和自愿檢測指征例數為主，最高檢出率來自 T21 錯過篩查時間指征，其余不同指征檢出率均較低，維持在 0～1.1% 之間的檢出率，篩查陽性分布從 0 到 22 例不等， 因此確診例數較少。針對 T21 三體陽性，檢出率 最高的為錯過其它篩查時間檢出率為 2.21%，其次為高齡妊娠 0.73% 和雙胎 /IVF-ET 妊娠 0.78% 的檢出率，血清學 篩查高 / 臨界風險為 0.40%，最低檢出率為自愿組 0.22% ； 針對 T18 三體陽性，檢出率最高的為錯過其它篩查時間檢 出率為 1.10%，其次為 T18 高齡組指征，檢出率為 0.37%， 最低為 T18 自愿組 0.06% ；針對 T13 三體，T13 自愿組和 高齡出檢出率相近，分別為檢出率為 0.09% 和 0.07% ；針 對性染色體異常 SCA（Sex chromosome abnormality）陽性， 錯過其它篩查時間篩查檢出率為 0.55%，SCA 自愿組和高 齡組檢出率相近，分別為檢出率為 0.47% 和 0.44% ；針對 常染色體異常檢出率，高齡組檢出率為 0.22%，略高于 0.19% 自愿組檢出率，確診為常染色體異常的 1 例來源于母親遺 傳，正常分娩并跟蹤隨訪，無異常表現。
引起假陽性的原因主要有以下三方面因素 ：標本的 來源 ：無創 DNA 通過采集孕婦外周血，從中分離胎兒的游 離 DNA，這部分 DNA 來源于胎盤的脫落細胞，若孕婦 胎盤存在拷貝數變異或者異常時，往往會在無創檢測中提 示高風險，而這類高風險其實與胎兒本身是否存在染色體 異常關系較小，此類假陽性可采用產婦分娩后對胎盤不同 部位進行取材后再進行高通量檢測，寄希望能找到胎盤與 NIPT 篩查陽性的關系研究 ；母體基因組本身存在拷貝數變 異 ：如存在惡性腫瘤時，導致母體體內存在大量的腫瘤細 胞，此類細胞 DNA 會增加，直接導致無創檢測指標提示 存在異常，此類也會導致篩查假陽性情 ；測序技術本身的 局限性 ：高通量測序技術在短時間內可對大量數據進行檢 測分析，但是容易出現錯誤概率，目前測序平臺的錯誤率 有 Q20/Q30/Q40 等級別，如 Q20 平臺，即提示存在 1% 的 錯誤率，這會導致數據結果異常，由于是高通量測序而非 Sanger 測序，因此會出現覆蓋率和測序深度等問題，若降 低芯片上樣量，在一定程度上可以提高測序準確性，但是 成本較高。因此特別強調 NIPT 高風險不能作為引產指征， 必須進行產前診斷才能判定，在臨床咨詢工作中應提高孕 婦對 NIPT 這項新技術的風險認知，且強調產前診斷費 用報銷問題，減輕其經濟壓力，孕婦在根據 NIPT 提示高 風險時，是否接受產前診斷除與遺傳咨詢相關外，還與孕 婦本身的身心狀態、文化背景和教育認知水平，經濟狀況 等因素有關，應盡最大程度避免孕婦因上述問題而導致選 擇終止妊娠。
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