膜性腎?。∕embranous nephropathy,MN)是臨床 上較為常見的一種腎小球疾病,是成人腎病綜合癥 常見病理類型之一。其病理特征主要為腎小球毛細 血管基底膜彌漫性增厚,且伴隨著上皮細胞下免疫 復合物沉積。該病遷延難愈,有超過 40%患者進一 步發展為慢性腎衰竭。目前針對 MN 治療尚無特效 藥物,臨床常使用激素、細胞毒性藥物、免疫抑制 劑等藥物進行治療,但這些藥物總體療效不佳,且 往往伴隨著一系列不良反應。因此,亟需探尋安 全有效的治療 MN 的藥物。近年研究發現,中醫藥在 治療 MN 方面有著獨特優勢,可與西藥進行聯合規范 化治療,有助于控制 MN 的病情進展,降低藥物不良 反應的發生。
1 材料與方法
1.1 動物
SD 大鼠 45 只,雄性,SPF 級,體質量(200±20)g,廣州中醫藥大學實驗動物中心提供,動 物許可證號:SCXK(粵)2013-0034。
1.2 藥物及試劑
白芍總苷,寧波立華制藥有限公 司,批號:20140712;醋酸潑尼松片,廣東華南藥 業集團有限公司,批號:140502;白蛋白(ALB)測定 試劑盒(批號:20160518)、總蛋白(TP)測定試劑盒 (批號:20160523)、總膽固醇(TC)測定試劑盒(批 號:20160412)、甘油三酯(TG)測定試劑盒(批號: 20160513)、 丙 二 醛(MDA)測 定 試 劑 盒(批 號 : 20160416)、總超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒(批 號:20160507),均為南京建成生物工程研究所產 品;Beclin1 抗體(批號:3738s)、PI3K 抗體(批號: 4257S)、p-Akt 抗體(批號:4060P)、mTOR 抗體(批 號:2983S)、Desmin 抗體(批號:5332D)、β-actin 抗體(批號:D0615),均為美國 CST 公司產品;LC3 抗 體,英國 Abcam 公司,批號:ab192890;Synaptopodin 抗體,美國 Santa Cruz 公司,批號:sc-515842。
1.3 儀器
THM51119300 全波長酶標分析儀,美國 Thermo Fisher Scientific 公司;T15RT 臺式高速冷凍 離心機,上海天美生化儀器設備工程有限公司; HH.S11-6 電熱恒溫水浴鍋,上海博訊提供;天能凝 膠成像系統,上海天能化學發光工作站;TE2000-S 熒光倒置顯微鏡,日本 NIKON 公司。
1.4 分組、模型復制及給藥方法
大鼠適應性喂養 1 周后,隨機分出 8 只作為正常對照組,其余大鼠按 以下方法進行模型復制:取制備好的 C-BSA(參照 Border 法制備)1 mg 加入 0.5 mL 弗氏不完全佐劑制備成乳劑,于大鼠皮下進行多點注射預免疫。1 周 后,大鼠隔天尾靜脈注射 2.5 mg C-BSA,連續 3 周。模型復制結束后,用考馬斯亮藍法測定各大鼠 24 h 尿蛋白含量,與正常對照組比較,剔除模型復 制組中尿蛋白為陰性的大鼠,然后隨機分為模型 組,TGP 高、低劑量(200、100 mg·kg-1)組,醋酸潑 尼松(5 mg·kg-1)組,每組 8 只。采取直接灌胃法給 藥,每日 1 次,連續 4 周??瞻讓φ战M和模型組給 予等體積生理鹽水灌胃。
2 結果
見表 1。與正常對照組比較,模型 組大鼠血清中 TP、ALB 含量顯著降低(P < 0.01), TC、TG 含量顯著升高(P < 0.01);與模型組比較, TGP 高、低劑量組和醋酸潑尼松組大鼠血清中 TP、 ALB 含量顯著升高(P < 0.05,P < 0.01),TC、TG 含 量顯著降低(P < 0.01)。
與正常對照組比較,模型組大鼠血 清中 MDA 含量顯著升高(P < 0.01),SOD 含量顯著 降低(P < 0.01);與模型組比較,TGP 高、低劑量組 和醋酸潑尼松組大鼠血清中 MDA 含量顯著降低(P < 0.01),SOD 含量顯著升高(P < 0.05,P < 0.01)。
3 討論
TGP 是從傳統中藥毛茛科植物白芍中提取的一組 糖苷類物質,是白芍的主要有效成分 。近年來已被 廣泛應用于治療各種免疫性疾病 。研究表明,該藥 單用或者聯合使用治療各種類型腎臟疾病,如糖尿 病腎病、狼瘡性腎炎及腎病綜合癥等均顯示出良好 治療效果,能夠有效地緩解腎病臨床癥狀及調節異 常血液生化指標。與傳統治療藥物比較還具有 不良反應小,無肝功能損傷的優勢。因此,深入探 討 TGP 治療慢性腎病的作用及相關作用機制具有重 要的臨床價值。