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羅非魚是我國重要的淡水養殖魚類品種之一， 其在捕撈、運輸、宰殺過程中易受自身與外界因素 影響，導致營養價值和食用價值降低。冰溫保鮮 是一種既吸收了冷凍、冷藏技術優點，又克服了兩 者不足的保鮮技術。在冰溫貯藏條件下，微生物 生長受到阻礙，但仍會有許多嗜冷菌繁殖，因此單 純的冰溫保鮮維持魚片品質效果有限 。利用生 物保鮮劑對羅非魚片進行保鮮，可以彌補冰溫保鮮 不足之處，從而實現提高冰溫羅非魚片品質，延長 其貨架期的目的。
1 材料與方法
1.1 實驗材料與設備
主要材料：羅非魚，購于湛江市湖光市場。主 要試劑：海藻酸鈉，源葉生物 ；Nisin，萬利達生物科技有限公司；異 VC 鈉，廣州利源食品添加劑 有限公司；2-硫代巴比妥酸，國藥集團化學試劑優 先公司；平板計數瓊脂，北京陸橋技術有限責任公 司；海藻酸鈉、Nisin、異 VC 鈉為食品級，其他試 劑均為分析純。主要設備：AUY220 分析天平，日 本島津儀器有限公司；DZ400/2D 真空包裝機，瑞 利包裝機械有限公司；PHS-3C 雷磁 pH 計，上海儀 電科學儀器有限公司； 125 均質機，上海依肯機械設備有限公司；HHS 恒溫水浴鍋，上海博迅實業有限公司；Vap450 凱氏定氮儀，德國 Gerhardt 公司； 博迅HPX-9082MBE 電熱恒溫培養箱，上海博迅實業有 限公司；SW-CJ-2D 雙人單面凈化工作臺，蘇州凈 化設備有限公司；LDZX-50KBS 立式壓力蒸汽滅 菌器，上海申安醫療器械廠。
1.2 實驗方法
1.2.1 樣品處理
將活魚宰殺，除去頭，尾，表皮 及內臟，修整成規格 12 cm×5 cm×1 cm，質量為 （80±2）g 的魚片。
1.2.2 單因素實驗
使用無菌蒸餾水分別配制不 同濃度梯度的保鮮液：海藻酸鈉保鮮液（2、4、6、 8、10 g/L，Nisin 保鮮液（0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 g/L）， 異 VC 鈉保鮮液（3、56、9、12、15 g/L ）。新鮮魚 片修整后立即放入各保鮮液中，于 4 ℃環境中浸漬 15 min，無菌蒸餾水浸漬相同時間的魚片作為對照 組，浸漬結束后于無菌環境自然瀝干 5 min。瀝干 后的魚片真空包裝后于-2 ℃環境中貯藏，每隔 5 d 對魚片進行相關指標測定。
1.2.3 復合保鮮劑正交優化實驗
在單因素實驗 基礎上將 3 種保鮮劑復合，采用 3 因素 3 水平的正 交實驗，研究復合保鮮劑的最佳配比。海藻酸鈉、 Nisin、異 VC 鈉的水平取值范圍見表 1。
1.2.4 指標測定
1.2.4.1 菌落總數
參照 GB/T4789.2—2016 的方 法進行測定。菌落計數以菌落形成單位（colony-forming units，CFU）表示，菌落總數測定 結果取常用對數。
1.2.4.2 揮發性鹽基氮(wTVB-N)
按照《食品中揮發 性鹽基氮的測定》GB5009.228—2016 的方法進行測 定，采用自動凱氏定氮儀法。
1.2.4.3 硫代巴比妥酸(wTBA)值測定
參照 Lan等的方法并稍作修改。稱 10 g 絞碎魚肉與 40 ml 預 冷的體積分數 5%的三氯乙酸混合，10 000 r/min 均 質 1 min，然后在冷凍離心機上以 5 000 r/min 離心 5 min，過濾上清液，吸取 5 mL 濾液于比色管中， 隨即再加 5 mL 0.02 mol/L 的硫代巴比妥酸試劑并 充分混勻，于沸水中反應 30 min 取出，流動水冷卻 到室溫（約 15 min）。以蒸餾水為參照，在 532 nm 處測定溶液的吸光值。有下列公式計算 wTBA值： wTBA = D ×7.8 式中 wTBA為硫代巴比妥酸值，單位：mg/kg（每 kg 樣品中丙二醛含量）；D 為溶液在 532 nm 處的光 密度值；7.8 為常數。
1.2.4.4 pH
參照 GB5009.237—2016 中規定的方法測定
1.2.4.5 感官評價
參照官愛艷等方法并稍作改 動。由 6 名感官評定人員組成感官評定小組，按照 表 2 要求對魚片進行評分，分值在 9 分（新鮮）和 0（完全腐?。┲g，5 分以下則表示魚肉不可食用， 最終結果取 3 項評分平均值并進行統計分析。
1.2.5 數據處理
采用 Excel 2007 進行數據記錄和 整理，用 SPSS18.0 軟件進行統計分析，設置顯著 水平為 P < 0.05，使用 Origin8.0 作圖。實驗結果均 為 3 次平行實驗平均值。
2 結果與分析
各濃度海藻酸鈉處理的魚片微生物 繁殖速度和wTVB-N值的增長速率均顯著低于對照組 （P < 0.05）。海藻酸鈉酸鈉溶液可通過浸泡或涂膜 等方式在魚片表面形成一層隔絕氧氣的薄膜，從而 達到減慢魚肉脂肪氧化進程和需氧菌的生長速率的目的。貯藏前 10 d，各濃度海藻酸鈉處理的魚 片菌落總數差異不明顯（P > 0.05），但從貯藏 15 d 起至貯藏末期，2 g/L 和 4 g/L 海藻酸鈉處理的兩 組魚片微生物繁殖速度明顯加快，原因是兩個濃度 溶液形成的薄膜阻隔性能不佳。貯藏 15 d 時，6、8、 10 g/L 這 3 個濃度處理組魚片菌落總數(cfu/g)對數 分別為 5.72、5.64、 5.93，海藻酸鈉濃度在 6 g/L ~ 8 g/L 之間能較好的抑制微生物的繁殖，且濃度高 于 8 g/L 后魚片細菌總數略有上升，應該是由于海 藻酸鈉濃度過大使得涂膜液變得粘稠，從而導致微 生物的代謝產物在魚片內部積累使得保鮮效果下 降，這與郗澤文的研究結果相似。各濃度海藻酸 鈉處理的魚片 wTVB-N 值的變化趨勢大致與菌落總 數相似。wTBA值反映了魚片在貯藏過程中脂肪氧化 的程度。對照組魚片隨著貯藏的進行脂肪氧化程度 不斷加大，顯著高于各濃度海藻酸鈉處理組，說明 海藻酸鈉處理可以減慢了魚片氧化的進程。整個貯 藏進程中，各組魚片的 pH 值均呈現先下降后上升 的趨勢。貯藏前 10 d，對照組魚片的 pH 值與各濃 度海藻酸鈉處理的魚片差異不大，貯藏 15 d，對照 組魚片的 pH 回升幅度明顯大于其他處理組，說明 對照組魚片蛋白質分解的程度大于各濃度海藻酸 鈉處理的魚片。綜合各指標來看，海藻酸鈉濃度在 6 ~ 8 g/L 范圍內魚片品質維持相對較好
3 結論
單因素實驗篩選以及正交實驗表明，3 種保鮮 劑的最佳配比是海藻酸鈉濃度為 8 g/L ，Nisin 濃 度為 0.8 g/L ，異抗血酸鈉濃度 7.5 g/L 。該復合保 鮮劑抑制微生物繁殖作用顯著，有效減緩魚片揮發 性鹽基氮和脂肪氧化的上升趨勢，同時可以延緩 pH 值的回升。與對照組相比，魚片的感官品質和貨架 期得到了有效保持和延長，貨架期由 15 d 延長至 22 d，冰溫羅非魚片品質得到極大改善。
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