采用 CdTe 量子點偶聯志賀氏菌抗體作為 熒光標記,制備一種用于能快速可視化檢測志賀氏菌 的免疫熒光試紙條,該試紙條可實現對肉品中志賀氏菌的快速、簡便、可視化定量檢測。JEM-2100 高分辨率透射電子顯微鏡:日本電子 株式會社;F-2500 FL 熒光光譜儀:日本 Hitachi 公司; pHS-3C 酸度計:上海雷磁公司;HM3230 點膜儀、 ZQ2002 自動切條儀:上海金標生物科技有限公司; WI95549 冷凍干燥儀:東西儀(北京)科技有限公司; GZX-9240MBE 電熱恒溫干燥箱:上海博迅實業有限公司。
在硝酸纖維膜上用 HM3230 點膜儀噴涂志賀氏 菌鼠抗和羊抗鼠二抗形成檢測帶和質控帶,將量子點 標記好的志賀氏菌抗體均勻地噴涂在樣品墊上,將樣 品墊、硝酸纖維膜和吸水墊依次組裝,用試紙條切刀 切割成試紙條,干燥箱干燥后封裝,避光保存于 4 ℃ 備用。將志賀氏菌菌 懸 液 10 倍梯度稀釋制備的 1× 102 CFU/mL~1×108 CFU/mL 志賀氏菌菌液分別滴加到 試紙條加樣孔中,反應 5 min,待免疫反應達到平衡后, 在紫外燈下觀察質控線和檢測線,每個樣本重復測定 6 次。結果判定:目視 T 帶的熒光強度,與空白對照,熒 光越弱,代表待測溶液中含被測物的濃度越低,出現 熒光的最低濃度即為最低檢測限。試驗顯示制備的熒光免疫層析試紙條與其它致 病菌均無交叉反應,表明制備的試紙條特異性較好。