三斑海馬及其混偽品的DNA條形碼分子鑒定研究

《中國藥典》2015 年版記錄并收載 5 個品種的 海馬藥材：三斑海馬 Hippocampus trimaculatus Leach、線紋海馬 Hippocampus kelloggi Jorden et Snyder、大海馬 Hippocampus kuda Bleeker、刺海馬 Hippocampus histrix Kaup 和小海馬（海蛆） Hippocampus japonicus Kaup 的干燥體，有散結消 腫、溫腎壯陽等功效。三斑海馬（俗名龍落子）， 隸屬我國國家二級保護動物，通常棲息在 1～100 公尺左右的具海藻床的礁石區中，也可生長在河海 交界處，喜食活餌，糠蝦、毛蝦、磷蝦、螢蝦等小 型浮游甲殼動物是其主要食物來源，其體色艷麗， 無毒，具有良好的觀賞價值。

1 材料與儀器 

1.1 材料 

共收集海馬藥材樣品 13 份，分別購自 浙江磐安以及安徽亳州藥材市場，包括三斑海馬樣 品 12 份，寶珈海龍樣品 1 份，經浙江中醫藥大學 第一臨床醫學院葛宇清副研究員鑒定為三斑海馬 Hippocampus trimaculatus Leach 和寶珈海龍 Doryichthys boaja Bleeker。將所用樣品做好標記， 于干燥封口袋中避光保存，樣品保存于浙江中醫藥 大學藥學院。同時在 GenBank 數據庫中下載 20 條 COI、16 S 和 ATP6 序列（線紋海馬 H. kelloggi Jorden et Snyder 3 條，大海馬 H. kuda Bleeker 2 條，小海 馬 H. mohnikei Bleeker 3 條，刺海馬 H. histrix Kaup 2 條，太平洋海馬 H. ingens Girard 2 條，直立海馬 H. erectus Perry 2 條，虎尾海馬 H. comes Cantor 2 條，棘海馬 H. spinosissimus Weber 3 條，擬海龍 Syngnathoides biaculeatus Bloch 1 條）。 

1.2 試劑 

無水乙醇（上海凌峰化學試劑有限公司）；海 洋動物組織基因組 DNA 提取試劑盒（天根生化 科技有限公司）；瓊脂糖粉（BIOWEST）；50×TAE 緩沖液[生工生物工程（上海）股份有限公司]； DL2000 DNA Marker（TaRaKa 公司）；6×Loading Buffer（TaRaKa 公司，）；4S Green 染料（BBI Life Sciences）；10×PCR buffer（TaRaKa 公司）；dNTP Mix（TaRaKa 公司）；rTaq 酶（TaRaKa 公司）； COI、16 S rRNA 和 ATP 引物由上海桑尼生物科 技有限公司合成。

1.3 主要儀器設備 

電子天平[賽多利斯科學儀器（北京）有限公 司]；電熱恒溫水槽（上海森信實驗儀器有限公司）； 超微量分光光度計（美國 Thermo 公司）；鼓風干燥箱（上海博迅實業有限公司醫療設備廠）；微波爐 （格蘭仕微波生活電器有限公司）；S1000TM Thermal Cycler（美國 Bio-rad 公司）；凝膠電泳儀（美國 Bio-rad 公司）；凝膠成像系統（美國 Bio-rad 公司）； 離心機（杭州寶誠生物技術有限公司）。