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肌源性因子 5（Myogenic factor 5，Myf5）是肌源 性調節因子家族成員，是骨骼肌調節基因 ，負責脊 椎動物胚胎的骨骼肌生成 ，在骨骼肌形成初期對 肌原細胞增殖分化起主要作用 ，與肌原性分化密 切相關 。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 試驗動物
共選取 16 只健康小鼠，即幼齡 小鼠（7 日齡）、性成熟小鼠（21～28 日齡）、體成熟 小鼠（42～56 日齡）和老齡小鼠（84 日齡以上）各 4 只，均由山西農業大學試驗動物中心提供。
1.1.2 主要試劑與儀器
氯仿、異丙醇、無水乙醇 （天津天大化工）、RNAiso Plus、PrimeScript TMRTreagent Kit（Perfect Real Time）、SYBR Premix Ex Tap（Takara）、 Myf5 抗體（三鷹）、β-actin（三鷹）等；立式壓力蒸汽滅菌器（上海博迅BXM-30R）；光學顯微鏡（Leica 公司）、普通 MYF5 儀（Bio-Rad 公司）、Mx3000P 實時熒光定量 PCR 儀及相應的檢測軟件（Agilent）、高速冷凍離心 機（Sigma 公司）、凝膠成像儀（Panasonic 公司）、超 凈工作臺（SW-CJ-CO 型，蘇州市華宇凈化設備有 限公司）。
1.2 方法
1.2.1 取材
通過斷頸使小鼠安樂死，將小鼠用 70%酒精徹底噴灑（以防止小鼠皮毛污染），用鑷子 拾起腹部皮膚，然后用鋒利的剪刀做一個縱向切 口，沿相反方向剝去皮膚，沿脛骨兩側插入和延伸 剪刀，切除腓腸肌，分為 2 份，一份快速放入液氮速 凍，一份放入固定液固定。
1.2.2 引物設計與合成
試驗所用引物均根據 GenBank Myf5 基因對應（登錄號：17877）的小鼠序 列，采用 Premier 5.0 軟件進行實時熒光 PCR 引物 設計，由北京華大公司合成（表 1）。
2 結果與分析
幼齡小鼠的細胞核多位于細 胞邊緣，肌纖維的橫切面近似圓形；性成熟、體成熟 小鼠的肌纖維多排列致密，呈簇排列，胞核多位于 周邊，肌纖維的橫切面近似多邊形；老齡小鼠肌纖 維排列松散，肌束間間隙增大。表明從幼齡到體成 熟階段，隨著年齡的不斷增加，肌纖維在不斷生長， 肌纖維的直徑不斷增加，肌纖維的橫切面由近似圓形逐漸變為多邊形，肌束排列更加緊密；而在老齡 階段，肌束間的間隙逐漸增大。陽性組和陰性組明顯不同，陰性 組細胞核呈現藍色，胞質為淡粉色。表明 Myf5 的表 達定位于細胞核中，Myf5 在幼年、體成熟、性成熟、 老年小鼠的 4 個不同發育階段的骨骼肌中均有表 達，且免疫組織化學結構染色深淺不一，陽性組幼 齡階段著色較深。表明 Myf5 在幼年階段的表達量 較多，而在性成熟、體成熟、老年階段的表達量相對 較少。
3 結論與討論
肌源性因子 5 是一種人體內由 Myf5 基因編碼 的蛋白質，在調節肌肉分化或肌生成，特別是骨 骼肌的發育中發揮關鍵作用 。Myf5 在肌源性分 化中起著重要作用。此外，Myf5 是肌肉發育的主要 調控因子，在成纖維細胞中表達時，具有誘導肌肉 表型的能力。研究發現，Myf5 在早期體細胞的皮 肌組中表達，能促使肌源性前體分化為成肌細胞 ，肌生成方面發揮作用的同時，也間接控制了近端肋 骨的發育與骨骼肌再生 。Myf5 是衛星細胞的關 鍵細胞標志物之一，在肌肉損傷再生中起著重要作用，當肌肉發生損傷時，處于靜止狀態的衛星細 胞被激活，通過增殖、分化后重新形成新的骨骼肌 細胞，從而實現骨骼肌損傷修復 。
