Ⅱ級生物安全柜人員、產品和交叉污染保護測試

依據JJF1815-2020《Ⅱ級生物安全柜校準規 范》，人員、產品和交叉污染保護測試采用微生物 法或碘化鉀法，仲裁時用微生物法。人員、產品和 交叉污染保護項目，此三個校準項目的操作方式相 似，其中人員保護項目是生物安全柜的校準中難度 較大的項目，操作較為繁瑣復雜。下面以其中最受 關注的人員保護項目為例進行測試方法說明。

1.  人員保護的微生物法測試 微生物法是將已經配制完成的不同濃度枯草 芽孢桿菌菌液以噴霧器主動釋放，由碰撞采樣器和 狹縫采樣器進行收集，磷酸鹽緩沖液和營養瓊脂培養皿充當載體的方式，對安全柜人員、產品和交叉 污染保護進行檢測的實驗方法。作為JJF1815-2020 《Ⅱ級生物安全柜校準規范》的仲裁檢驗方法以及 NSF49中唯一承認的檢驗方法，微生物法科學、準 確、有效。 在試驗開始前安全柜啟動并運行至少30min， 并連續運行至所有測試完成。將安全柜氣流流速設 置為標稱值，使其處于正常工作狀態下。

 2. 試驗儀器分布設置 將盛有55mL濃度為5×108CFU/mL～8×108CFU/ mL枯草芽孢桿菌芽孢計數標準物質（或粘質沙雷 氏菌標準物質）菌液的噴霧器置于安全柜內，距左 右兩側壁距離相等，噴霧器噴射軸在工作臺面上方 360mm處，噴嘴前端距前窗操口內側100mm，且正對 前窗操作口，如圖4所示。 干擾圓筒置于安全柜中央，且中心軸在工作臺 面上方70mm，圓筒一端緊靠安全柜后壁，另一端 應伸出安全柜前窗操作口至少150mm。被檢安全 柜前共放置6個左右對稱的撞擊采樣器，分別盛有 20mL的無菌稀釋液，且采樣口正對安全柜。其中 圓筒周圍設4個撞擊采樣器，它們的采樣口前端距 安全柜63mm。其中，兩個撞擊采樣器的采樣口軸 線相距150mm，與圓筒上沿平齊；兩個撞擊采樣器 采樣口軸線相距50mm，位于距圓筒下沿30mm的水 平面上。另兩個撞擊采樣器的采樣口前端距安全柜 50mm，采樣口軸線相距300mm，采樣口位于工作臺 面上360mm處的水平面上。 設置兩個狹縫采樣器，其采樣平面與安全柜 工作臺面平齊，采樣口的垂直軸線在安全柜前方 150 m m處，兩個 狹縫采樣器距離左右側壁均為 200mm。當安全柜標稱寬度小于90cm時，設置兩個 狹縫采樣器，其采樣平面與安全柜工作臺面平齊， 采樣口的垂直軸線在安全柜前方150mm處，兩個狹 縫采樣器距離左右側壁均為50mm。設置兩個狹縫 采樣器，采樣口位于工作臺面上360mm處的水平面 上，采樣口的垂直軸線在安全柜前方50mm處，兩個撞擊采樣器的采樣口軸線相距150mm，如圖2所示。 取一個作為對照的培養皿放置在圓筒中心軸下方， 且位于前窗進氣格柵上方或下方10mm處，使其對 進氣氣流干擾最小。

3. 試驗步驟 試驗需重復進行3次，每次30分鐘，試驗順序 如表1所示

依據JJF1815-2020《Ⅱ級生物安全柜校準規 范》，將采集的濾膜在無菌條件下封入培養皿中，在 37℃下培養24～48h后進行微生物計數。由于該方 法需要更高的操作和設備要求，且需耗時數天才能 得到結果，無法當場驗證，因此日常校準中常采用 碘化鉀法。